Visualisation de protéines et de leurs interactions in cellulo
http://www.bulletins-electroniques.com/actualites/41413.htm
BE Allemagne 323 >> 22/02/2007 Sciences du vivant
Des scientifiques du Centre de Recherche en Environnement et Santé (GSF) près de Munich viennent de mettre au point une méthode de marquage fluorescent qui permet, pour la première fois, de visualiser les interactions protéiques ainsi que les partenaires respectifs de la réaction, à l'intérieur d'une cellule vivante. "Jusqu'à présent, lorsqu'il n'y avait pas de signal d'interaction, on ne pouvait pas savoir si l'interaction n'avait pas lieu ou si l'un des partenaires de la réaction n'était pas synthétisé". C'est ce que précise le Dr. Ruth Brack-Werner qui a développé un nouveau système de visualisation : exBiFC, "extended Bimolecular Fluorescence Complementation".
L'équipe de chercheurs a validé cette technique en travaillant sur l'identification des mécanismes cellulaires responsables de la multiplication de virus VIH. Pour cela, ils ont dû étudier les interactions entre les protéines cellulaires et les protéines régulatrices du virus, notamment la protéine Rev. Cette phosphoprotéine inhibe l'épissage des ARN messagers (ARNm) viraux et permet leur transport vers le cytoplasme pour la traduction et donc la formation de nouveaux virions. Les interactions de Rev dans la cellule peuvent être visualisées grâce à l'exBiFC.
La technique consiste à associer les deux partenaires d'interaction potentiels à un peptide-fusion fluorescent respectivement rouge ou bleu ainsi qu'à deux fragments complémentaires du peptide-fusion jaune. Ainsi, les fluorescences rouge et bleu indiquent que les deux partenaires de l'interaction ont bien été produits dans la cellule. Si les deux partenaires interagissent, le peptide-fusion jaune est reconstitué et un signal fluorescent est alors visualisé. Grâce à cette technique, l'équipe du Dr. Brack-Werner a pu mettre en évidence, dans des cellules vivantes, l'interaction des protéines Rev entre elles ainsi qu'avec les protéines cellulaires impliquées dans le transport nucléo-cytoplasmique, Risp (Rev-interacting shuttle protein) et Exportine-1 (CRM-1). Cet outil élégant ouvre la voie à de nombreuses applications pour l'étude des interactions in cellulo, notamment dans le cas du VIH.
pour en savoir plus, contacts : - Prof. Dr. Ruth Brack-Werner - GSF, Institut deVirologie Moléculaire, Neuherberg - tél : +49 89 31872923, fax : +49 89 3187 3329 - email : brack@gsf.de - H. Wolff, A. Hartl, H. M. Eilken, K. Hadian, M.Ziegler, R. Brack-Werner : "Live-cell assay forsimultaneous monitoring of expression and interactionof proteins", BioTechniques, 41:688-692, (2006)
source : Dépêche idw, communiqué de presse du Centre deRecherche en Environnement et Santé - 12/02/2007 rédacteur : Anaïs Manin, anais.manin@diplomatie.gouv.fr Origine : BE Allemagne numéro 323 (22/02/2007) -Ambassade de France en Allemagne / ADIT -
www.comptabilite-travailleur-independant.com
